Większość białek dzięki obecności tyrozyny i tryptofanu wykazuje maksimum absorpcji w X = 280 nm.
Zawartość tyrozyny i tryptofanu w białkach enzymatycznych jest zbliżona. Stąd istnieje możliwość oznaczania ilościowego białek na zasadzie pomiaru gęstości optycznej w), = 280 nm. Związkami wysokocząsteczkowymi mogącymi wpływać na wielkość absorbancji w lambda = 280 nm są kwasy nukleinowe (KN). Maksimum absorpcji dla kwasów nukleinowych występuje przy X = 260 nm.
W metodzie opracowanej przez Warburga i Christiana dokonuje się pomiaru gęstości optycznej w lambda = 260 nm i 280 nm. Wartość stosunku A280/A260 jest różna w zależności od stosunku ilości białka do ilości kwasów nukleinowych; i tak dla krystalicznej enolazy
Spis treści:
I. Metody oznaczania białka (Jadwiga Gniot-Szulżycka, Antoni Leźnicki. Barbara Wojczuk)
1. Oznaczanie białka metodą pomiaru absorbancji w ultrafiolecie
2. Oznaczanie ilościowe białka metodą pomiaru absorbancji w ultrafiolecie według Whitakera i Granuma
3. Szybka i czuła metoda oznaczania białek metodą Bradford z użyciem barwnika Coomassie Brilliant Blue G-250
4. Ilościowe oznaczanie białek metodą Lowry i wsp.
5. Oznaczanie białek metodą Bensadouna i Weinsteina
6. Kolorymetryczne oznaczanie białek metodą biuretową
7. Oznaczanie ilościowe białka z kwasem bis-cynchoninowym (BCA)
8. Oznaczanie ilościowe białka w roztworach zawierających związki zakłócające (detergenty)
II. Ełektroforetyczne metody rozdziału białek
1. Elektroforeza białek w żelu agarozowym (Antoni Leźnicki)
2. Elektroforeza białek w żelu poliakrylamidowym - natywna w wersji rurkowej (Jadwiga Gniot-Szulżycka)
3. Rozdział białek na drodze ogniskowania izoelektrycznego w żelu poliakrylamidowym (Jadwiga Gniot-Szulżycka)
4. Elektroforeza w żelu poliakrylamidowym z SDS (Antoni Leźnicki)
5. Immunoelektroforeza i podwójna immunodyfuzja (Jadwiga Gniot-Szulżycka)
6. Immunodetekcja białek metodą ?Western" Blotting (Jadwiga Gniot-Szulżycka)
7. Metody barwienia białek po rozdziałach elektroforetycznych (Jadwiga Gniot-Szulżycka, Antoni Leźnicki, Barbara Wojczuk)
III. Chromatografia kolumnowa
1. Chromatografia jonowymienna białek mikrosomów pszenicy (Michał Komoszyński)
2. Wykorzystanie HPLC do separacji i oczyszczania białek (Michał Komoszyński)
3. Chromatografia hydrofobowa białek - izolacja i oczyszczanie rekombinowanego białka GFP z lizatu bakteryjnego (Antoni Leźnicki)
4. Chromatografia chelatująca na nośnikach z immobilizowanymi jonami metali (Antoni Leźnicki)
5. Oczyszczanie białek metodą chromatografii powinowactwa na immobilizowanych ligandach grupowo-specyficznch (Antoni Leźnicki, Jadwiga Gniot-Szulżycka)
6. Synteza Cibacron Blue-Sepharose 4B i oczyszczanie sulfohydrolazy arylosiarczanów B (Antoni Leźnicki)
7. Chromatografia powinowactwa z użyciem lektyn sprzężonych z sefarozą (Jadwiga Gniot-Szułżycka)
8. Detergenty - związki stosowane w ekstrakcji białek błonowych (Jadwiga Gniot-Szulżycka)
9. Wyznaczanie mas cząsteczkowych białek metodą sączenia żelowego na kolumnie Superose 12 (Antoni Leźnicki)
IV. Dodatek (Jadwiga Gniot-Szulżycka, Antoni Leźnicki)
